技術文章
鉛(Pb),是多系統、多親和性的重金屬性的毒物,主要試嗜胎盤和嗜神經性毒物,鉛在體內任何痕量的存在即會造成傷害,如達到一定濃度,還會對兒童大腦造成不可逆轉的損害。血鉛值反映近期鉛的攝入量,常作為體內暴露水平的重要指標。世界衛生組織(WHO)規定了各類人群的血鉛生物閾限值,兒童為100ug/L。目前國家未見推薦方法,1999年,衛生部頒布了.標準編號為WS/T174-1999血鉛的酸脫蛋白──石墨爐原子吸收光譜法,我們參照此方法并改用10%(V/V)硝酸去除血中蛋白,再根據血樣粘稠進樣時容易飛濺等特點,設置了石墨爐程序升溫,分兩步干燥,解決了血樣容易飛濺的難題。為評估方法的準確性,進行了忙樣分樣,結果滿意。樣品的回收率為86%-103%,相對標準偏差RSD=4.19%。
1實驗部分
1.1方法原理
全血經10%HNO3容血和去血蛋白質后,充分振蕩高速離心沉淀。取上清液用石墨爐原子吸收光譜測定鉛含量。
1.2儀器和試劑
1.2.1AA-1800原子吸收光譜儀,鉛空心吸收燈。
1.2.2血鉛標準儲備液
濃度分別為38ug/L、112ug/L、284.2ug/L、385.7ug/L,(中國預防醫學科學院環衛所)。
1.2.3 1.5ml帶蓋聚乙烯離心管。
1.2.4 液體高速混合器。
1.2.5 高速臺式離心機。
1.2.6 10%(V/V)硝酸,取10mL高純硝酸用純水稀釋到100L。
1.2.7 25、50、1000ul可調微量加樣器。
1.2.8 儀器工作條件
pb測定波長283.3nm,燈電流3mA,光譜帶寬0.2nm,保護氣:氬氣。氘燈扣除背景。
1.3 標準曲線制作
各取50uL鉛標準儲備液管內壁呈環狀加入事先已裝有300uL10%HNO3的1.5帶蓋聚乙烯
管中,這時濃度被稀釋7倍,標準系列濃度分別為:0.0ug/L5.43ug/L16.0ug/L40.6ug/L55.1ug/L。立即置高速液體旋渦混合器混勻30/s,放置30min后以1000rpm速度離心10min,取上清液20ml進樣,測定吸光值,繪制濃度──吸光度標準曲線,回歸方程:y=3.394×10-3X+0.0103r=0.9992,線性范圍5ug/L-100ug/L
1.4 樣品測定
取50uL抗凝血同標準曲線制作,然后取上清液20uL進行石墨爐分析,從標準曲線中查出對應濃渡,乘以稀釋倍數 即得血中鉛含量。
2 結果與討論
2.1升溫程序
由于樣品的粘度較大,干燥時容易飛濺,我們將其分為兩步干燥,并將第二部干燥時間相應延長,解決了容易飛濺。
表1石墨爐升溫程序
程序起始溫度(℃)終止溫度(℃)時間(s)氣體
干燥60 120 25 打開
干燥120 130 20 打開
灰化130 450 20 打開
灰化450 450 10 打開
灰化450 450 6 關閉
原子化2000 2000 4 關閉
清楚 2300 2300 3 打開
2.2精密度和回收率實驗
取血樣重復測定6次,并添加標樣測定回收率,結果見表2和表3
表2精密度實驗結果(n=6)
血樣值(µg/L)測定值(µg/L)S RSD(%)
10.8 11.2 11.3 0.45 4.19
10.2 10.3 10.7
表3回收率實驗結果
血樣本底加標量測定次數回收率平均回收率
(µg/L)(µg/L) (n) (%) (%)
20.4 20 5 86.2-103.5 92.4
2.3盲樣的測定
我們用此法測定了中國醫科院環衛所提供的質控樣,結果見表4和表5。兩組質控樣經統計學處理,其質空評估值Q<[1],表明整體操作存在誤差較小,測試結果合格。
表4質控實驗結果
質控樣代號 測試值(µg/L) 真值(µg/L)
p1 116.4 118
p2 148.5 147
p3 318.2 314
p4 182.2 191
p5 80.8 87
環衛所提供
表5質控樣結果
質控代號 測試值(µg/L) 真值(µg/L)
1 102.8 110
2 194.4 280
3 22.3 20
4 47.2 48
5 345.2 362
6 162.5 157
環衛所提供
2.4 樣品的穩定性
通過實驗,血羊經處理后2h穩定,因血液成分較為復雜,超過兩小時后,結果不穩定,所以血樣處理后應盡快測定。
3 小結
本文通過對去蛋白 石墨爐測定血鉛方法的探討摸索,根據本實驗條件對實驗條件進行了改進,證明本法具有快速準確靈敏度高等特點,加之用血量少,手指血或耳垂即可,兒童易于接受,很適用于大面積測定兒童血鉛含量。